A este gran conquistador y colonizador de tierras americanas se le supone nacido en 1511 en Rionegro del Puente (Zamora). Hijo del que ostentaba el cargo de señorío de esas tierras. A los 15 años entra al servicio de la casa de los Condes de Benavente para, 10 años más tarde, embarcarse a América junto con su amigo Pedro Reinoso. 

          Alistado en Puerto Rico, entra a formar parte de las milicias de Antonio Sedeño, personaje un tanto oscuro que sin autorización real se dedicaba a conquistar territorios y a apresar a los indios para venderlos como esclavos. Esta circunstancia hizo que los hombres de Sedeño fueran siempre perseguidos por las tropas del gobernador, Jerónimo de Ortal, que representaba a la Corona española.  

           Estos años al servicio de Sedeño transcurrieron en la costa de Venezuela entre los ríos Neveri y Unare, conocidos popularmente como Castilla del Oro por lo llano de sus tierras y por el oro de sus minas –las de Borbutara-. 

          A la muerte de Sedeño surgen dos facciones, una dirigida por Reinoso y otra por Losada quien exploró tierra adentro bordeando el río Apure, afluente del Orinoco (Venezuela). Meses más tarde, tras perder numerosos hombres por el hambre y las enfermedades, se dirige hacia la costa bordeando el río Barquisimeto fundando la ciudad de su mismo nombre, para regresar en barco a Marcapana, en la costa oriental venezolana. Allí debió Losada dedicarse al tráfico de esclavos. 

           Dos largos años habría empleado Losada en su expedición por Venezuela y Colombia, y en ellos habría recorrido alrededor de 2.000 km. 

Fue quizás por el año 1545 cuando comienza una nueva etapa en la vida de Diego de Losada, abandonando el tráfico de esclavos y pasando al servicio de Juan Pérez de Tolosa, hombre honrado, gobernador de la ciudad de Santo Domingo. 

          Es en estos años cuando se hace con las comarcas de los indios Humocaros y de los Quinbure. Formó parte en la segunda fundación del Tocuyo por lo que se le concedió una encomienda de indios llamado Cubiro, que conservaría hasta su muerte. Participó en la conquista del Apure –río que discurre al este de Venezuela-; en la ocupación del Valle de Santiago y en la de los Llanos de Cucuta. 

          Al morir el gobernador Pérez de Tolosa fue nombrado sustituto Villegas, antiguo compañero de Losada. Es entonces cuando se funda Nueva Segovia de Barquimisero donde a Losada se le dan nueve encomiendas de indios y se le nombra alcalde de la ciudad. 

           A finales de 1566 le insta el gobernador de Venezuela Ponce de León, quien le nombra Juez de Comisión de Residencia en Tocuyo, para participar como capitán en la conquista del Valle del Miedo, la Tierra de los indios Teques y la comarca de Toromayna.  

          En 1567 fundó, en honor a la patrona de su lugar de nacimiento, la villa de Nuestra Señora de la Carballeda en la costa venezolana, pero, sobre todo, su mayor gesta fue la fundación de la ciudad de Santiago de León de los Caracas, actual capital de Venezuela. 

          Tras el fallecimiento de Ponce de León pidió ser nombrado gobernador de Venezuela, pero en su lugar lo fue Francisco Hernández de Chaves, quien solo hacía un año que estaba en Santo Domingo. Por ese motivo elevó una súplica a Felipe II, que, al parecer, nunca llegó. 

          Poco tiempo después murió Don Diego en Borburata (Venezuela) a finales de 1569.